Süper Mario Kardeşler Filmi, Mario ve Luigi adlı Brooklynli iki musluk tamircisinin fantastik bir maceraya atılmalarını konu alıyor. Film, Mario ve erkek kardeşi Luigi'nin sıradan yaşamlarının, bir gün tesadüfen bir ana su borusunu tamir ederken bambaşka bir hale gelmesiyle başlar. Bu beklenmedik olay, onları paralel bir dünyaya, yani Toadstool Krallığı'na taşır. Bu yeni dünyada, ikili, kötü Kral Koopa'dan (Bowser) prensesi kurtarmak için birlikte mücadele eder. Film, renkli karakterler, aksiyon dolu sahneler ve eğlenceli bir hikaye ile tanınan Süper Mario evrenini büyük ekranda canlandırıyor. İzleyiciler, Mario ve Luigi'nin cesaret, dostluk ve kahramanlık dolu bu macerasına tanıklık ederken, aynı zamanda nostaljik video oyun dünyasındaki öğeleri de keşfedecekler.